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普瑞瑪“實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型與藥物評(píng)價(jià)”專欄九 | 大鼠支氣管哮喘模型的病理學(xué)評(píng)價(jià)來(lái)源:普瑞瑪 時(shí)間:2023-11-02 11:06:30 瀏覽:2751
1.概述 支氣管哮喘(bronchial asthma)簡(jiǎn)稱哮喘,是由多種炎性細(xì)胞(如嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等)和細(xì)胞組分參與的以氣道慢性炎癥為特征的異質(zhì)性疾病。以氣道高反應(yīng)性、肺部炎癥及氣道重塑為主要特點(diǎn),炎癥使氣道可逆性狹窄并導(dǎo)致患者出現(xiàn)呼吸困難[1]。 支氣管哮喘的臨床表現(xiàn)為:反復(fù)發(fā)作的喘息、氣急、胸悶或咳嗽等癥狀;常在夜間及凌晨發(fā)作或加重,同時(shí)伴有可變的基礎(chǔ)氣流受限和氣道高反應(yīng)性;隨著病程的延長(zhǎng)可導(dǎo)致氣道結(jié)構(gòu)的改變,即氣道重塑[2]。 2.造模方法 本公司采用雞蛋清白蛋白,成功復(fù)制了大鼠支氣管哮喘模型。選取檢疫合格的SPF級(jí)SD大鼠20只,隨機(jī)分為正常對(duì)照組(8只)和模型組(12只)。模型組大鼠采用腹腔注射4%雞蛋清白蛋白(OVA)0.5mL/只,同時(shí)腹腔注射2%的Al (OH)3 0.5mL/只進(jìn)行致敏,1次/周,共兩次,正常對(duì)照組大鼠僅腹腔注射2%的Al(OH)3 0.5mL/只,并于致敏第15天將模型大鼠置于小動(dòng)物口鼻暴露染毒系統(tǒng),將2%雞蛋清白蛋白溶液霧化后,以20g/cm3氣溶膠吸入激發(fā)30min,每周1次,共三次,以誘導(dǎo)哮喘發(fā)作。造模后動(dòng)物出現(xiàn)呼吸心率加快、擺頭、打噴嚏、點(diǎn)頭呼吸時(shí)有聲響、持續(xù)抓鼻孔、咳嗽、煩躁不安等表現(xiàn)說(shuō)明哮喘模型成功建立[3]。 3.一般狀態(tài)觀察 記錄實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的一般狀態(tài),確定實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是否產(chǎn)生支氣管哮喘癥狀。正常對(duì)照組大鼠未見異常反應(yīng);模型組大鼠可見有點(diǎn)頭樣喘息、口唇紫紺、煩躁、易激惹、搔鼻、弓肩聳肩、抓耳等表現(xiàn)。反復(fù)激發(fā)后,體重增長(zhǎng)緩慢,毛發(fā)欠光澤,精神狀態(tài)差。 4.樣本采集及處理 各組大鼠腹主動(dòng)脈放血安樂死,取支氣管和肺臟,置于10%中性福爾馬林溶液固定,石蠟包埋,切片,HE染色。 5.病理學(xué)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 以送檢組織的形態(tài)學(xué)改變?yōu)榛A(chǔ),建立了相關(guān)病理學(xué)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[4]。建議在200倍光鏡下觀察,隨機(jī)選取3~4個(gè)形態(tài)規(guī)整的支氣管橫斷面,直徑約100~200μm進(jìn)行觀察。肺組織HE染色表現(xiàn)為支氣管管腔變狹窄,管腔內(nèi)黏膜皺褶增生、上皮細(xì)胞脫落、腫脹,肺泡及肺組織結(jié)構(gòu)破壞,支氣管及血管周圍大量以淋巴細(xì)胞為主的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等典型的哮喘病理學(xué)改變。HE染色評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)詳見表1。
6.組織病理學(xué)檢查結(jié)果 正常對(duì)照組動(dòng)物:肺泡及細(xì)支氣管結(jié)構(gòu)基本正常(圖A),支氣管管壁無(wú)明顯增厚、管腔尚規(guī)則、黏膜上皮及固有層未見炎性細(xì)胞浸潤(rùn),氣道平滑肌未見明顯增厚(圖C)。 模型組動(dòng)物:肺泡、細(xì)支氣管結(jié)構(gòu)紊亂,肺泡壁增厚,細(xì)支氣管管腔變狹窄,管腔內(nèi)黏膜上皮增生形成皺褶,上皮細(xì)胞腫脹、脫落,細(xì)支氣管及血管周圍大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)(圖B)。支氣管上皮細(xì)胞變性、壞死,支氣管固有層大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn);管壁平滑肌明顯增厚(圖D)。
7.參考文獻(xiàn) [1] KIRBY T.Respiratory disease advocate living with severe asthma[J].Lancet Respir Med,2022,10(2):132-134. [2] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)哮喘學(xué)組.支氣管哮喘防治指南(2020年版)[J].中華結(jié)核和呼吸雜志, 2020, 43(12):1023-1048. [2] 陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2010. [4] 任雪交,黃巍,邱菲菲,等.支氣管哮喘動(dòng)物模型研究的文獻(xiàn)分析與評(píng)價(jià)[J]. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與比較醫(yī)學(xué),2022,42(1):74-80
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